Revista del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Jornadas Científicas del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel: Un Aporte a la Promoción de la Investigación en Ciencias de la Salud

**Actividad comparativa in vitro de Doripenem y otros carbapenemicos frente a Pseudomonas aeruginosa aisladas en el Laboratorio de Microbiología del Hospital Vargas de Caracas**

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno oportunista responsable de un importante número de infecciones nosocomiales, puede adquirir fácilmente resistencia a la mayoría de las drogas de utilización clínica. Los antibióticos betalactámicos componen la familia más numerosa y utilizada en la práctica clínica, constituyen una opción terapéutica en infecciones producidas por bacilos Gram negativos no fermentadores de la glucosa, como por ejemplo P. aeruginosa. En el Hospital Vargas de Caracas, laboratorio de Microbiología, según datos KERMIC en el año 2013 se obtuvieron aislamientos de P. aeruginosa con porcentajes de sensibilidad disminuida a los carbapenémicos de 61% a imipenem y 59% a meropenem. En el año 2007 la FDA y en 2008 la EMEA aprobaron el uso de un nuevo carbapenémico; doripenem, de amplio espectro con cobertura frente a Gram positivos, Gram negativos y anaerobios. El objetivo general de esta investigación fue analizar comparativamente la actividad de doripenem con otros carbapenémicos en Pseudomonas aeruginosa aisladas en el laboratorio de microbiología del Hospital Vargas de Caracas. Se realizó a través del método de difusión en disco y la detección de MBLs por el test de EDTA; se encontraron porcentajes de sensibilidad similares para los tres carbapenémicos ensayados y un bajo porcentaje de cepas MBLs positivas.

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen responsible for a significant number of nosocomial infections, can easily acquire resistance to most drugs in clinical use. Beta-lactam antibiotics comprise the largest and most used in clinical practice, they constitute a therapeutic option in infections by non-fermenting gram-negative bacilli of glucose, such as P. aeruginosa. In the Vargas Hospital of Caracas, microbiology laboratory, according KERMIC data in the year 2013 184 P. aeruginosa isolates with decreased sensitivity rates to carbapenemes were obtained from 61% to 59% to imipenem and meropenem. In 2007 the FDA and EMEA in 2008 approved the use of a new carbapenems; doripenem, broad spectrum coverage against Gram positive, Gram negative and anaerobic. The overall objective of this research was to comparatively analyze the pattern of susceptibility doripenem with other carbapenems in Pseudomonas aeruginosa isolated in the microbiology laboratory of the Vargas Hospital of Caracas. It was carried through the disk diffusion method and detecting MBLs by EDTA test; similar percentages of sensitivity for the three tested carbapenems and a low percentage of positive strains were found MBLs.

Diseño del Kit de Tinción Ziehl Neelsen del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

La tinción de Ziehl Neelsen (ZN), es una técnica de coloración de microorganismos para la identificación de patógenos, como Mycobacterium tuberculosis causante de la tuberculosis, que requiere de tres (03) soluciones: Carbol Fucsina Fenicada (Fucsina Básica), Azul de Metileno al 1% y Solución Decolorante, que se elaboran en la Sección de Reactivos y Colorantes del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel y se emplean en el diagnóstico de tuberculosis. Esta investigación surgió con el propósito de comprobar el tiempo de caducidad y condiciones de almacenamiento de dichos productos y presentarlos en un estuche tipo kit para su distribución, en apoyo a la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública y comercialización con otros entes. Se realizó el ensayo de tres (3) lotes del kit de Ziehl Neelsen; con su respectiva contramuestra que fue evaluada en el análisis final. Se registraron los parámetros físicos de temperatura y humedad relativa bajo condiciones normales de almacenamiento en el laboratorio, con las muestras protegidas de la luz. Se evaluó la funcionalidad por medio de la tinción ZN observada bajo microscopio, de tres (03) muestras con ATCC 700686: M. peregrinum y ATCC 29213: S. aureus por lote; tomando en cuenta el exceso de colorante, y la definición de las coloraciones. Estas evaluaciones se realizaron durante dos (02) años encontrándose como resultado que física y funcionalmente los productos contentivos en el kit se mantenían estables, fijándose un tiempo de caducidad de dos (02) años.

Ziehl Neelsen (ZN) is a staining technique of microorganisms for the identification of pathogens as Mycobacterium tuberculosis, causative of tuberculosis, which requires three (03) solutions: Carbol Fuchsin combined with Phenol (Basic Fuchsin), Methylene Blue 1% and Bleaching solution, which are prepared in Section of Reagents and Coloring of the Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel and are used in the diagnosis of tuberculosis. This investigation was made with the purpose of checking the shelf life and storage conditions of these products and present them in a kit type container for distribution in support of the National Network of Public Health Laboratories and marketing with other entities. The analysis was performed in three (3) batches of the Ziehl Neelsen kit; with their respective counter sample that was evaluated in the final analysis. The physical parameters of temperature and relative humidity were recorded in the laboratory under normal storage conditions with samples protected from light. The functionality was evaluated through ZN staining being observed under a microscope three (03) samples with ATCC 700686: M. peregrinum and ATCC 29213: S. aureus by Batch; taking into consideration the excess dye, and the definition of the colors. These evaluations were conducted for two (02) years found as main result that physically and functionally the products in the kit were stable, and can set an expiration time of two years.

Estudio comparativo entre dos técnicas comerciales para la cuantificación de carga viral plasmática en pacientes infectados por el Virus de Inmunodeficiencia Humana Tipo 1

Los ensayos de cuantificación de ARN plasmáticos de VIH-1 son importantes para el control de pacientes infectados, así como el monitoreo de la respuesta a la terapia antirretroviral. Por lo tanto, los ensayos comerciales empleados para este propósito deben presentar buena correlación entre si, para dar lugar al manejo terapéutico apropiado. El objetivo del estudio consistió en correlacionar los resultados obtenidos mediante el ensayo de amplificación de señal (bDNA) y PCR en tiempo real (RT-PCR), ambas casas comerciales aprobadas por la FDA y con diferente diana de detección del VIH-1. La validación se realizó con 180 muestras clínicas de pacientes referidos al INHRR. Los resultados fueron comparados con la subpoblación de linfocitos TCD4+ determinados mediante citometría de flujo. El análisis estadístico se realizó empleando el coeficiente de regresión lineal de Pearson (R²) y el valor de contraste de hipótesis con una significancia del 95 %, usando el programa SPSS Statistics v10.0. Se observó una buena correlación entre los ensayos (R²=0.961, p<0.05), siendo la RTPCR más sensible. Las diferencias cuantitativas de carga viral entre las técnicas ensayadas fue menor de 0.5 log10 copias/ml para el 89% de las muestras, y >1 log10 copias/ml solo en dos pacientes, no indicando necesariamente cambio terapéutico. Adicionalmente, se encontró una correlación inversa entre los linfocitos TCD4+ y carga viral del VIH-1 medida por bDNA (R²= 0.20, p<0.05) y RT-PCR (R²= 0.15, p<0.05). Los ensayos evaluados mostraron que ambas técnicas puedes ser empleadas indistintamente para el control de los pacientes VIH positivo.

The assay for quantification of plasma HIV-1 RNA are important for the control of patients infected, as well as the monitoring of the response to antiretroviral therapy. Therefore, the commercial assays used for this purpose must submit good correlation between to give place to the appropriate therapeutic management. In this study, we correlate the results obtained through the testing of signal amplification (bDNA) and real-time PCR (RT-PCR), two comercial technical approved by the FDA and with different targets of detection HIV-1. The validation was carried out with 180 clinical samples of patients referred to the INHRR. The results were compared with the subpopulation of lymphocytes TCD4+ determined by flow cytometry. The statistical analysis was performed using the program SPSS Statistics v10. It was observed good correlation between the tests studied (R²=0.961, p<0.05), with RT-PCR more sensitive. The quantitative differences in viral load between the techniques tested was less than 0.5 log10 copies/ml for the 89% of the samples, and >1 log10 copies/ml in only two patients. Additionally, it was found an inverse correlation between lymphocytes TCD4+ and viral load of HIV-1, measured by bDNA (R²= 0.20, p<0.05) and RT-PCR (R²= 0.15, p<0.05). Therefore, these assays can be employed for the patient control HIV.

**Plásmido conjugativo portador de integrón clase 1 responsable de la resistencia a los antibióticos en aislados de Vibrio cholerae O1 en Venezuela**

Se han descrito aislados de Vibrio cholerae resistentes a una amplia variedad de antibióticos. En Venezuela, durante el brote de cólera ocurrido entre noviembre de 1998 y enero 2000 fueron reportados por primera vez aislados de V. cholerae O1 resistentes a ampicilina, trimetoprim-sulfametoxazole. Usando experimentos de conjugación se determinó la capacidad de transferir los determinantes de resistencia a ampicilina y trimetoprim-sulfametoxazole en 11 aislados. La visualización de plásmidos se realizó utilizando la digestión con nucleasa S1 y electroforesis en campo pulsante. La presencia de integrones de clase 1 fue establecida por PCR y se obtuvo la secuencia de la región variable del integrón. Los determinantes de resistencia fueron transferidos en un plásmido conjugativo de aproximadamente 170 kbp, común a todos los aislados. La resistencia a trimetoprim esta codificada en el gen dfra15, el cual se encuentra en un integrón clase 1 presente en el plásmido. En este estudio, se caracterizó la localización genética de los determinantes que codifican la resistencia a los antibióticos, y al conocer el mecanismo probable de dispersión de los determinantes de resistencia se podrán implementar medidas de control más adecuadas.

Vibrio cholerae has been reported to be resistant to a wide range of antibiotics. V. Cholerae O1 strains resistant to ampicillin, trimethoprim-sulfamethoxazole were isolated for the first time in Venezuela during a cholera outbreak that occurred between November 1998 and January 2000. Using conjugation experiments, the capacity of transfer of the resistance determinants in 11 strains resistant to ampicillin and trimethoprim-sulfamethoxazole was investigated. Plasmid analysis was done by S1 nuclease digestion and pulsed field gel electrophoresis. The presence of class 1 integrons was determined by PCR and the sequence of the gene harbored in the variable region of the integron was obtained. The antibiotic resistance determinants were transferred by a conjugative plasmid of approximately 170 kbp, common to all the isolates. Resistance to trimethoprim is encoded by the dfra15 gene that is harbored by a class 1 integron present in the plasmid. In this study, the genetic location of the determinants that code for resistance to antibiotics was characterized, and knowing the probable mechanism of dispersion of the determinants of resistance, control measures can be implemented most appropriate.

Susceptibilidad a Ceftarolina en Staphylococcus aureus meticilino resistente

Ceftarolina es un antibiótico de última generación del subgrupo de las cefalosporinas. Es el primer beta-lactámico comercializado que presenta actividad frente a Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM). El objetivo del presente estudio fue describir el patrón de susceptibilidad a ceftarolina en SARM aislados en el Laboratorio de Microbiología del Hospital Vargas de Caracas. Material y métodos: El aislamiento e identificación de las cepas se realizo por pruebas bioquímicas convencionales y las pruebas de susceptibilidad por el método de Difusión en Disco según CLSI 2015. Resultados: Se analizaron un total de 100 cepas SARM, de las cuales el 100% resultó sensible para ceftarolina (≥ 24 mm), con un rango de 26-35 mm, no detectándose ninguna cepa intermedia ni resistente. Conclusión: Ceftarolina muestra una excelente actividad in vitro frente a SARM, por lo que podría presentarse como una alternativa prometedora en el tratamiento de infecciones causadas por este microorganismo.

Ceftaroline is an antibiotic of last generation cephalosporins subgroup. Is the first marketed beta-lactam having activity against Methicillin-resistant S. aureus (MRSA). The aim of this study was to describe the pattern of susceptibility to ceftaroline in MRSA isolated in the Microbiology Laboratory of Hospital Vargas of Caracas. Methods: Isolation and identification of the strains was performed by conventional biochemical tests and susceptibility testing by disk diffusion method according to CLSI 2015. Results: A total of 100 MRSA strains were analyzed, of which 100% he was sensitive to ceftaroline (≥ 24 mm), with a range of 26-35 mm, not detected any intermediate or resistant strain. Conclusion: Ceftaroline shows excellent in vitro activity against MRSA, so it could be presented as a promising alternative in the treatment of infections caused by this organism.

Validación del método de formación de coágulo para la determinación de endotoxinas bacterianas en inmunoglobulinas (IgG) nacionales

Las endotoxinas bacterianas son lipopolisacáridos (LPS) localizados exclusivamente en la membrana externa de las bacterias gramnegativas, su ingreso al organismo a través de productos parenterales puede causar fiebre, taquicardia, aumento de presión sanguínea y en algunos casos ocasiona la muerte. Existen normativas internacionales acerca del límite de endotoxina para productos farmacéuticos inyectables, tal como las inmunoglobulinas (IgG), que pueden estar expuestas a contaminación durante el proceso de producción y por lo tanto es necesario realizar pruebas para la determinación de endotoxinas bacterianas. El método del lisado de amebocitos de Limulus (LAL) es una de ellas. Este método se fundamenta en la reacción del LAL, el cual es un extracto de células sanguíneas que interaccionan con endotoxinas, activando la cascada del proceso de coagulación y originando la formación de la coagulina. En diversas ocasiones algunas proteínas intervienen en la activación o desactivación de esta cascada, bien sea potenciando o inhibiendo la formación del coágulo. En el caso de la potenciación, el calentamiento es uno de los métodos recomendados por la farmacopea estadounidense (USP) para eliminar interferencias, puesto que desnaturaliza las proteínas que causan la potenciación sin pérdida de endotoxinas. En este trabajo se validó la determinación de endotoxinas bacterianas en IgG mediante el método LAL, el cual es un método rápido y de fácilejecución, por lo que puede implementarse como ensayo de rutina en control de calidad y por ende nos permite agilizar las Liberaciones de Lotes de estos productos.

Bacterial endotoxins are lipopolysaccharides (LPS) located exclusively in the outer membrane of gram-negative bacteria, their entry into the body through parenteral products can cause fever, tachycardia, increased blood pressure and in some cases cause death. There are international standards for endotoxin limit for injectable pharmaceuticals, such as immunoglobulins (IgG), which may be exposed to contamination during the production process and therefore it is necessary to test for determination of bacterial endotoxins. The method of the Limulus amebocyte lysate (LAL) is one of them. This method is based on the LAL reaction, which is an extract of blood cells which interact with endotoxin, triggering the cascade of the coagulation process and causing the formation of coagulin. On several occasions some proteins involved in the activation or deactivation of this waterfall, either by enhancing or inhibiting clot formation. In the case of empowerment, the warming is one of those recommended by the US Pharmacopoeia (USP) to eliminate interference, since denatures proteins that cause endotoxin enhancement lossless methods. In this paper the determination of bacterial endotoxins in IgG was standardized by the LAL method, which is quick and easy to implement method, which can be implemented as a routine test in quality control and thus allows us to streamline releases Lots of these products.

Mecanismos de resistencia en micobacterias de crecimiento rápido

Las Micobacterias de crecimiento rápido (MCR) son patógenos oportunistas capaces de ocasionar infecciones en piel, pulmonares y diseminadas. En Venezuela existe un incremento de estas infecciones derivadas de procedimientos invasivos, entre ellas cirugías estéticas. El tratamiento de esas infecciones requiere la administración de al menos dos antibióticos por varios meses. En la presente revisión se describe los mecanismos de resistencia a los antibióticos que se han reportado en las MCR, principalmente las tres especies que frecuentemente se han asociado a infecciones en piel: M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum. Los factores más importantes relacionados a la resistencia en los esquemas de tratamiento son: cambios relacionados en la permeabilidad de la membrana al antibiótico, la inactivación enzimática y modificaciones del sitio blanco. En MCR se han evidenciado la presencia de betalactamasas con actividad penicilinasas y cefalosporinasas y de acetil-transferasas que pueden modificar los aminoglicósidos. Las modificaciones de las regiones ARNr 23S y ARNr 16S han permitido explicar, en parte, la resistencia a macrólidos y aminoglicósidos. La metilación de los sitios blanco de acción de los macrólidos es otro factor importante, sobre todo en especies como M. abscessus. Éste último mecanismo explica la falla terapéutica que se ha reportado en pacientes tanto en infecciones pulmonares como en infecciones en piel. Es necesario ampliar el estudio sobre los mecanismos de resistencia en estas especies, tomando en consideración las complicaciones que llevan estas infecciones y los tiempos prolongados de tratamientos pudiendo generar efectos secundarios en los pacientes y la frustración cuando ocurre la falla terapéutica.

The rapid growing mycobacteria (RGM) are opportunist pathogens able to cause skin, pulmonary and disseminated infections. In Venezuela there is an increase in the prevalence of these infections especially following esthetic surgery. The treatment of such infections is cumbersome requiring the administration of at least two antibiotics for several months. In the present review we describe the principal antibiotic resistance mechanisms reported for RGM, particular for the species most frequently associated with skin and soft tissue infection: M. abscessus, M. chelonae and M. fortuitum. The most important factors associated with resistance to antibiotics are impermeability of the cell membrane, enzymatic inactivation and changes in the target site. In RGM the presence of the beta-lactamases with penicillinases and cephalosporinase activity has been demonstrated and the presence of acetyl-transferases which can modify aminoglycosides. Changes in the 23S rRNA and 16S rRNA regions has allowed to explain, partly macrolide and aminoglycoside resistance. Mutation in the macrolide target site is another important resistance mechanism, particularly for the species group M. abscessus. This last mechanism can explain treatment failure reported in the patients with pulmonary or skin infection. We conclude that there is a need for more extensive studies about the mechanisms of antibiotic resistance of RGM; taking into account the complications of these infections, the prolonged treatment long time, producing secondary effects and the frustrations of patient and physician caused by therapeutic failures.

Semblanza del Maestro José Vicente Scorza

Los seres humanos que desde niños son curiosos, con imaginación inquieta, observadores y sedientos por conocer el por qué de la certeza perfecta de la naturaleza, sensibles al arte, a la solidaridad humana, a las cosas sencillas del pueblo, con memoria sin vacilaciones y gran capacidad de amar, pocas veces pasan por la vida desapercibidos, especialmente si disfrutan de una vida larga y plena. Uno de ellos es el maestro José Vicente Scorza a quien conocí de niña como un profesor investigador héroe de la guerrilla urbana en Venezuela en los años sesenta y más tarde, como mi maestro en parasitología durante el doctorado. Comparto en esta breve semblanza algunos rasgos de su personalidad y logros, incluyendo los académicos, en el curso por su vida.

Those human beings that since childhood are curious with restless imagination, observant and thirsty for understanding the hows and whys of Natures perfect certainty; those who are sensible to the Arts, to human solidarity and watching for the common layman´s needs; with unhesitating memory and countless love to give, these human beings rarely pass through life unnoticed, especially if they enjoyed a long and full life. Maestro José Vicente Scorza was one of them. I have knew him since I was just a girl as the Research Professor, hero of Venezuelan Urban Guerrilla in the 1960s and later, as my Professor in Parasitology during my Doctorate. I want to share with you a brief biography and some anecdotes about his personality and his achievements, including those academic ones, in his journey through life.

Ética, calentamiento global y salud: Parte I

Herramientas bioinformáticas para el análisis de secuencias en el Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

¿Por qué el Problema de investigación?

Memorias de las XXXIX Jornadas Científicas Dr. José Vicente Scorza, 2016 del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Resúmenes de Pósters Científicos Presentados en las XXXIX Jornadas Científicas Dr. José Vicente Scorza, 2016 del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Resúmenes de Pósters Divulgativos Presentados en las XXXIX Jornadas Científicas Dr. José Vicente Scorza, 2016 del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Revista del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Jornadas Científicas del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel: Un Aporte a la Promoción de la Investigación en Ciencias de la Salud

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Diseño del Kit de Tinción Ziehl Neelsen del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel